線粒體檸檬酸(MCA）含量試劑盒紫外分光光度法說明書

紫外分光光度法 25管/24樣 50管/48樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

商品屬性：

產(chǎn)品名稱：線粒體檸檬酸(MCA）含量試劑盒紫外分光光度法

貨號(hào)：LZ-S01147-A

規(guī)格 : 25管/24樣 50管/48樣

測試方法:紫外分光光度法

產(chǎn)品分類：三羧酸循環(huán)系列

發(fā)貨地：上海

測定意義:

CA是線粒體三羧酸循環(huán)的個(gè)中間產(chǎn)物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，（3）乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。

測定原理:

CA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng)，生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

酸性提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

堿性提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 15mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃

保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，10μmol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

線粒體中檸檬酸提取：

稱 0.05~0.1g 樣品（建議稱 0.1g 樣本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃

離心 5min；取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃離心 10min，棄上清（取 300μL 該上清液和 300μL 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測定）；沉淀即線粒體，向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），取此溶液 300μL 和 300μL 堿性提取液中和，混勻，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。

生化檢測試劑盒操作步驟：

一、?準(zhǔn)備工具和環(huán)境?：確保操作臺(tái)面干凈、整潔，這是進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)的步。南京

?二、?仔細(xì)閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎(chǔ)，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。

三、樣本采集?：按照說明書的指導(dǎo)，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。

?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產(chǎn)生泡沫，以確保檢測的準(zhǔn)確性。

?五、?等待反應(yīng)?：混合后，耐心等待試劑盒的反應(yīng)，這個(gè)時(shí)間可以用來進(jìn)行其他活動(dòng)，但不要著急，因?yàn)楹玫慕Y(jié)果值得等待。

六、結(jié)果判讀?：時(shí)間到后，仔細(xì)判讀結(jié)果。試劑盒通常會(huì)有明確的指示，告訴你如何根據(jù)顯示的線條或顏色來判斷結(jié)果。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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PF4重組人 CXCL4 / PF4 蛋白 Protein

腦型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP7)重組蛋白 Recombinant Fatty Acid Binding Protein 7, Brain (FABP7)

ANXA8重組人 Annexin A8 / ANXA8 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

EGFR Protein Human 重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (His 標(biāo)簽)

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PorcineEsadiol,E2ELISA試劑盒豬雌二醇(E2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項(xiàng):

①加入試劑的順序應(yīng)一致,以所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。